Аналіз ПЛР.
Аналіз ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція) - найбільш сучасний і точний метод лабораторної діагностики багатьох інфекцій. За відкриття даного методу досліджень американського вченого Керрі Мюлліса в 1993 році був нагороджений Нобелівською
премією. Використання аналізу ПЛР на інфекції застосовно як для
бактеріальних, так і для вірусних захворювань. При цьому дане дослідження здатне діагностувати хвороби в гострій, хронічній формах і маловідомі захворювання. Що ж собою являє ПЛР-діагностика і коли вона застосовується?
Метод полімеразної ланцюгової реакції
Метод аналізу ПЛР на інфекції полягає в идентифицирования збудників інфекційних захворювань на основі визначення їх генетичного матеріалу (РНК або ДНК) в пробах, отриманих від пацієнта.
У ході дослідження в спеціальний реактор поміщають зразок біологічного матеріалу (кров, виділення, мазок), в якому імовірно можуть бути ДНК мікроорганізмів. До зразком матеріалу додають спеціальні ферменти. Ці ферменти мають здатність зв'язуватися з ДНК мікроорганізму і синтезувати його копію. Реакція синтезування копії ДНК протікає за принципом ланцюгової реакції. На першому її етапі з однієї молекули ДНК формуються дві нові молекули. На другому етапі з цих двох молекул формуються чотири нові, і так далі. Після декількох циклів реакції з однієї копії ДНК утворюються кілька сотень або тисяч копій. Велика кількість копій ДНК мікроорганізму легко проаналізувати і порівняти з базою даних, в якій міститься інформація про будову ДНК різних збудників.
Аналіз ПЛР на інфекції застосовується для діагностики багатьох збудників, в тому числі збудників "прихованих" інфекцій , які характеризуються безсимптомним протіканням. У більшості лабораторій проводять дослідження даним методом на наступні інфекції:
хламідіоз статевих органів і дихальних шляхів;
гепатити В, С;
мікоплазмоз статевих органів і дихальних шляхів;
уреаплазмоз сечостатевої системи;
кандидоз статевих органов;
трихомониаз;
туберкулез;
инфекционный мононуклеоз;
герпесная інфекція;
ВІЛ (СНІД);
папіломавірусна інфекція;
хелікобактеріоз.
Фахівці вказують на багато переваг аналізу методом ПЛР.
1. Пряме діагностування наявності збудника. Більшість традиційних методів діагностики виявляють білки-маркери, які є продуктами життєдіяльності мікроорганізмів. Це є лише свідченням про наявність інфекції. Метод ПЛР прямо вказує на присутність конкретного збудника інфекційного захворювання в організмі.
2. Високий рівень специфічності. Метод ПЛР має високу специфічність завдяки тому, що в досліджуваному зразку матеріалу виявляють унікальний фрагмент ДНК, який характерний тільки для певного збудника. Це попереджає отримання помилкових результатів.
3 . Висока чутливість аналізу методом ПЛР . Даний метод дослідження дає можливість виявити навіть поодинокі клітини вірусів або бактерій. Визначення кількості збудників особливо важливо у разі виявлення умовно-патогенних мікроорганізмів, які стають патологічними тільки при збільшенні їх кількості.
4. Можливість діагностувати декілька збудників в одній пробі матеріалу. Подібність хімічного складу нуклеїнових кислот, що входять до ДНК або РНК збудників, дозволяє застосовувати даний метод для ідентифікації різних інфекцій.
5. Можливість виявлення прихованих і хронічних інфекцій.
Крім того, аналіз методомПЦР дуже ефективний щодо мікроорганізмів з високою антигенною мінливістю та внутрішньоклітинних паразитів.
6. Висока швидкість проведення аналізу методом ПЛР.
Розшифровка аналізу ПЛР зазвичай формулюється позначеннями "негативний результат" або "позитивний результат".
Позитивний результат аналізу ПЛР свідчить про тому, що в зразку матеріалу дослідження були визначені сліди інфекції. Таким чином, даний результат вказує на присутність в організмі тієї чи іншої інфекції.
Негативний результат аналізу ПЛР означає, що у зразку біологічного матеріалу дослідження не було виявлено слідів інфекції. Негативний результат у більшості випадків вказує, що в організмі немає інфекції, яку намагалися виявити даним методом аналізу.
Аналіз ПЛР на гепатит С
аналіз ПЦР на гепатит С - лабораторне дослідження крові, за допомогою якого виявляють генетичний матеріал (частку РНК) вірусу гепатиту С. Частинку РНК вірусу гепатиту С можна визначити даним методом якісно і кількісно.
Якісний аналіз свідчить про присутність вірусу гепатиту С в крові пацієнта. Дане дослідження проводять тим пацієнтам, в крові яких знайдені антитіла до гепатиту С. У розшифровці аналізу ПЛР на гепатит С може бути зазначено: "виявлено" або "не виявлено". Нормою вважається запис "не виявлено". Результат "виявлено" може вказувати на те, що вірус розмножується в організмі і постійно інфікує клітини печінки. Якісний аналіз за даним методом володіє певною чутливістю (10-500 МО/мл). При проведенні ПЛР-діагностики у хворих з низькою концентрацією вірусу (що проходять противірусне лікування) бажано застосовувати діагностичну систему, яка має чутливість не менше 50 МО/мл.
Кількісний аналіз ПЦР на гепатит С (вірусне навантаження) - дослідження на концентрацію вірусу в крові. Вірусним навантаженням називають кількість одиниць вірусної РНК, яке присутнє в деякому об'ємі крові (зазвичай в 1 мл, 1 см3). У розшифровці аналізу ПЛР це кількість позначають у цифрах, одиниці виміру - МО/мл.
Чим вище вірусне навантаження у людини, тим більший ризик передачі інфекції вертикальним шляхом або при статевих контактах. Крім того, високе вірусне навантаження значно ускладнює проведення противірусної терапії.
Згідно з розшифровкою аналізу ПЛР на гепатит С, високою вважається навантаження вище 800 000 МО/мл або 800? 103. Вірусне навантаження більше 1? 107 - дуже висока.
Аналіз ПЛР на хламідії
Хламідії - це внутрішньоклітинні паразити, які займають проміжне положення між рикетсіями (бактеріями) і вірусами. Дана інфекція вражає слизові тканини статевих шляхів, дихальних шляхів, кон'юнктиву.
Збудник урогенітального хламідіозу - хламідія Chl. Trachomatis дуже важко виявляється через свою двоїстої природи. Метод аналізу ПЛР на хламідії володіє достатньою чутливістю для якісного визначення даного збудника і діагностування наявності гострої стадії хвороби. Матеріалом для аналізу ПЛР на хламідії є осад сечі, сперма, секрет простати або зіскрібки з уретри і кон'юнктиви.
Результат аналізу ПЛР може бути негативним або позитивним. У разі негативного аналізу в бланку зазвичай вказується, що Chl. Trachomatis не виявлено, інфікування відсутня, гострий період захворювання відсутня. При позитивному результаті аналізу ПЛР, в бланку результату вказують: хламідіоз, який викликаний Chl. Trachomatis, гострий період первинного зараження або реактивація інфекції.